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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本產(chǎn)品結(jié)合了飽和染料EvaGreen和抗體酶的優(yōu)點(diǎn)，是一款適用于高分辨率熔解曲線（High Resolution Melting，HRM）分析的專業(yè)試劑盒。本品是一種2× PreMix，PCR反應(yīng)液配制十分簡(jiǎn)單方便；具有分辨率高和模板高度適應(yīng)性等特點(diǎn)。

與SYBR Green不同，EvaGreen在高濃度情況下不會(huì)抑制PCR反應(yīng)；可以使雙鏈PCR產(chǎn)物的結(jié)合量達(dá)到飽和狀態(tài)，所以稱為“飽和染料”。不會(huì)產(chǎn)生SYBR Green 的“染料重排”現(xiàn)象，能夠很好的區(qū)分?jǐn)U增產(chǎn)物之間單個(gè)堿基的差異。

本產(chǎn)品可用于已知SNP分析，以及未知突變基因掃描和甲基化PCR分析等研究。

試劑盒特點(diǎn)

1. HRM Analysis PreMix采用了抗體修飾的熱啟動(dòng)DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化Buffer體系，具有高擴(kuò)增效率，高擴(kuò)增特異性和寬廣的可信范圍的特點(diǎn)。

2. HRM Mix中預(yù)混有Eva Green飽和染料，其在飽和狀態(tài)下具很高的熔解曲線分辨率，可以區(qū)分單個(gè)堿基的變異。

3. 該產(chǎn)品獨(dú)特的Buffer體系進(jìn)一步增加了熔解曲線的穩(wěn)定性，提高擴(kuò)增的特異性。

4. 本產(chǎn)品附帶ROX Reference Dye，用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差，方便客戶針對(duì)不同型號(hào)熒光定量PCR儀時(shí)選擇對(duì)應(yīng)濃度使用。

儲(chǔ)存條件

收到本產(chǎn)品后， 請(qǐng)立即置于-20 ℃ 避光保存。從-20 ℃ 取出使用時(shí)， 將凍存的2x HRM Analysis PreMix和50×ROX Reference Dye溶解，然后輕輕顛倒混勻，待溶液完全均一后再行使用。如解凍后沒(méi)有使用，須徹底混勻后重新冷凍(在解凍過(guò)程中鹽會(huì)出現(xiàn)分層現(xiàn)象，未混勻進(jìn)行冷凍，鹽晶體的析出將會(huì)對(duì)酶造成損害)。如需一段時(shí)間內(nèi)經(jīng)常取用，可在2～8℃條件下儲(chǔ)存3個(gè)月。避免反復(fù)多次凍融。

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品中含有熒光染料EvaGreen，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。

2．如果試劑沒(méi)有混勻，其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。使用時(shí)請(qǐng)上下顛倒輕輕混勻，請(qǐng)不要使用振蕩器進(jìn)行混勻，盡量避免出現(xiàn)泡沫，并經(jīng)瞬時(shí)離心后使用。

3．引物純度對(duì)反應(yīng)特異性影響很大，建議使用PAGE級(jí)別以上純化的引物。

4．20 μl反應(yīng)體系中，基因組DNA模板的使用量一般小于100 ng，并盡量保持不同反應(yīng)之間有相同的模 量。模板純度，OD260/280 1.6~2.0，OD260/2301.5~2.0。

5．由于HRM具有很高的靈敏性，因此在條件允許的情況下推薦使用50 ul反應(yīng)體系，大的反應(yīng)體系可以提高反應(yīng)重復(fù)性，減少實(shí)驗(yàn)誤差對(duì)熔解曲線的負(fù)面影響。

6．引物設(shè)計(jì)：較短的PCR產(chǎn)物可以提高HRM的分辨率；因此在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)，遵循普遍的原則外，盡量保持產(chǎn)物長(zhǎng)度在80~120之間。SNP位點(diǎn)盡量處在PCR產(chǎn)物序列中間位置。