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產(chǎn)品簡介

pLB零背景快速克隆試劑盒是一種陽性選擇克隆系統(tǒng)，可以高效克隆各種PCR產(chǎn)物和任何具有平末端或粘性末端的DNA片段。該試劑盒對磷酸化或非磷酸化的DNA片段都有效。陽性選擇載體和插入片段連接僅需5 min即可獲得超過95%的陽性重組克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu Polymerase）擴(kuò)增的平末端PCR產(chǎn)物可直接連入克隆載體。由無校正活性的聚合酶（如：Taq Polymerase）或聚合酶混合物擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物在連接前需用試劑盒提供的熱穩(wěn)定DNA平端化酶進(jìn)行末端平端化（7 min）即可。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化常用的大腸桿菌菌株。

試劑盒提供一個新穎的即用型陽性選擇克隆載體pLB Vector。該載體含有致死基因（內(nèi)含多克隆位點(diǎn)），多克隆位點(diǎn)插入外源片段會引起基因失活，因此只有轉(zhuǎn)化了重組質(zhì)粒的細(xì)菌才能存活形成克隆菌落。而自身環(huán)化的pLB Vector表達(dá)致死的毒性蛋白（無外源片段插入），轉(zhuǎn)化后殺死大腸桿菌細(xì)胞。這種陽性篩選策略無需藍(lán)白斑篩選，極大地加速了克隆篩選進(jìn)程。

產(chǎn)品特點(diǎn)

高效快速：零背景無需藍(lán)白斑篩選，5 min快速連接

靈敏廣泛：適合低濃度片段和長片段連接，適合平/粘末端連接

不同片段使用量

1.載體與片段的摩爾比控制在1:3-1:10，對于1kb以下的片段建議使用1:3的比例，1kb以上的片段建議使用1:7的比例。

2.請根據(jù)凝膠電泳或紫外分光光度計(jì)檢測后的濃度和片段長度來計(jì)算其摩爾比。插入片段用量，可根據(jù)以下公式粗略計(jì)算：

連接體系中35ng的載體，不同大小的PCR產(chǎn)物最佳加入量舉例如下

pLB Vector圖譜

反應(yīng)體系

標(biāo)準(zhǔn)體系為10 μl體積，5 μl的反應(yīng)體系也能取得很好的效果，試劑用量減半。

保存條件

請將試劑盒置于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。