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產(chǎn)品簡介

pLB零背景快速克隆試劑盒（不含MCS）是一種陽性選擇克隆系統(tǒng)，可以高效克隆各種PCR產(chǎn)物和任何具有平末端或粘性末端的DNA片段。該試劑盒對磷酸化或非磷酸化的DNA片段都有效。陽性選擇載體和插入片段連接僅需5 min即可獲得超過95%的陽性重組克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu Polymerase）擴增的平末端PCR產(chǎn)物可直接連入克隆載體。由無校正活性的聚合酶（如：Taq Polymerase）或聚合酶混合物擴增的PCR產(chǎn)物在連接前需用試劑盒提供的熱穩(wěn)定DNA平端化酶進行末端平端化（7 min）即可。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化常用的大腸桿菌菌株。

試劑盒提供一個新穎的即用型陽性選擇克隆載體pLB-simple Vector。該載體含有致死基因，克隆位點處插入外源片段會引起基因失活，因此只有轉(zhuǎn)化了重組質(zhì)粒的細菌才能存活形成克隆菌落。而自身環(huán)化的pLB-simple Vector表達致死毒性蛋白（無外源片段插入），轉(zhuǎn)化后殺死大腸桿菌細胞。這種陽性篩選策略無需藍白斑篩選，極大地加速了克隆篩選進程。

產(chǎn)品特點

高效快速：零背景無需藍白斑篩選，5 min快速連接

靈敏廣泛：適合低濃度片段和長片段連接，適合平/粘末端連接

無多克隆位點：方便客戶自行引入酶切位點進行亞克隆

不同片段使用量

1.載體與片段的摩爾比控制在1:3-1:10，對于1kb以下的片段建議使用1:3的比例，1kb以上的片段建議使用1:7的比例。

2.請根據(jù)凝膠電泳或紫外分光光度計檢測后的濃度和片段長度來計算其摩爾比。插入片段用量，可根據(jù)以下公式粗略計算：

連接體系中35 ng的載體，不同大小的PCR產(chǎn)物最佳加入量舉例如下：

pLB-simple Vector圖譜

反應體系

標準體系為10 μl體積，5 μl的反應體系也能取得很好的效果，試劑用量減半。

保存條件

請將試劑盒置于-20℃保存，避免反復凍融。