要通過(guò)克隆化基因生產(chǎn)名副其實(shí)的真核生物活性蛋白，往往需要進(jìn)行翻譯后加工，像二硫鍵的形成、糖基化、磷酸化等等。受到自然界原核生物經(jīng)常分享遺傳物質(zhì)的啟發(fā)，人們開(kāi)始將一些外源分子如DNA、RNA、蛋白等分子導(dǎo)入真核細(xì)胞中，細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，尤其在研究基因功能、基因治療、基因表達(dá)調(diào)控的時(shí)候會(huì)經(jīng)常使用此技術(shù)。 
　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)又分瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，這是根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)決定的。轉(zhuǎn)染方法中最常用的是陽(yáng)離子脂質(zhì)體方法，它的適用性廣，適于所有細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)單方便。但是不同的細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效果差別很大，這與轉(zhuǎn)染試劑的特性有關(guān)。所以選擇一款合適的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)的成敗非常關(guān)鍵。 
　　天根公司目前有三款轉(zhuǎn)染試劑（Lipofect，DNAfectin，RNAfectin），均為陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，可對(duì)多種類(lèi)型的細(xì)胞達(dá)到較高的轉(zhuǎn)染效率，在優(yōu)化條件下將陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑加入水中時(shí)，它可以形成微小的（平均大小約100-400nm）單層脂質(zhì)體。這些脂質(zhì)體帶正電，可以靠靜電作用結(jié)合到DNA的磷酸骨架上以及帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，從而將俘獲的DNA導(dǎo)入培養(yǎng)的細(xì)胞。

Lipofect轉(zhuǎn)染試劑（RM201） 
★ 既可用作DNA轉(zhuǎn)染，也可用作RNA轉(zhuǎn)染 
★ 可在血清存在的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后無(wú)需除去轉(zhuǎn)染試劑 
★ 操作簡(jiǎn)單快速 
★ 轉(zhuǎn)染效率穩(wěn)定高效 
 

DNAfectin轉(zhuǎn)染試劑 (RM202)

★ 適用于將DNA轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞 
★ 獨(dú)特的DNA專(zhuān)用配方使復(fù)合體的形成更高效 
★ 更易于復(fù)合體結(jié)合到細(xì)胞膜表面 
★ 毒性更低，轉(zhuǎn)染效率更高 
★ 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都可高效轉(zhuǎn)染 
 

RNAfectin轉(zhuǎn)染試劑 (RM203)

★ 適用于將RNA轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞 
★ 獨(dú)特的RNA專(zhuān)用配方使復(fù)合體的形成更高效 
★ 更易于復(fù)合體結(jié)合到細(xì)胞膜表面 
★ 毒性更低，轉(zhuǎn)染效率更高 
★ 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都可高效轉(zhuǎn)染 
 

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

        轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的成敗與眾多因素的影響有關(guān)，包括細(xì)胞狀態(tài)、血清選擇、抗生素的加入、啟動(dòng)子的選擇、核酸的質(zhì)量、復(fù)合物的形成比例、試劑保存等等。 
1）細(xì)胞狀態(tài)：建議傳代細(xì)胞傳到第三代左右時(shí)就進(jìn)行轉(zhuǎn)染，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)良好的細(xì)胞。貼壁細(xì)胞的細(xì)胞鋪板密度建議在70-90％，懸浮細(xì)胞鋪板密度在2×10⁶－4×10⁶/ml。根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和培養(yǎng)基類(lèi)型，選擇合適的穩(wěn)定的培養(yǎng)溫度、濕度和CO2濃度，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程需要嚴(yán)格的無(wú)菌操作，防止細(xì)菌、支原體、真菌等的污染。 

2）血清選擇：選擇質(zhì)量穩(wěn)定的血清，在稀釋質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑時(shí)要用無(wú)血清的培養(yǎng)基稀釋?zhuān)駝t會(huì)影響復(fù)合物形成的效率，從而影響轉(zhuǎn)染效率。盡量在無(wú)血清條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率會(huì)比較高。轉(zhuǎn)染后換成新鮮的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，可以有效提供細(xì)胞的存活率。 

3）抗生素的加入：在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基、細(xì)胞鋪板培養(yǎng)基、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時(shí)的選擇性培養(yǎng)基中避免使用抗生素，因?yàn)檫@些抗生素會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率。 

4）啟動(dòng)子的選擇：對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染最好選擇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，對(duì)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染可選擇組成型啟動(dòng)子。

5）核酸的質(zhì)量：核酸的純度直接影響到轉(zhuǎn)染的效率。建議在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的時(shí)候，盡量用高純的質(zhì)粒提取試劑盒。尤其是轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，甚至要用無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒提取試劑盒。建議提取質(zhì)粒的濃度最好是1ug/ul，至少在500ng/ul以上。 

6）復(fù)合物的形成比例：第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)一定要做一個(gè)梯度實(shí)驗(yàn)摸索合適的核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例。一般說(shuō)明書(shū)上會(huì)有一個(gè)建議值范圍，但那主要是針對(duì)常規(guī)細(xì)胞種類(lèi)的實(shí)驗(yàn)建議值。由于細(xì)胞種類(lèi)很多，轉(zhuǎn)染的難易程度也不一樣，為了確保轉(zhuǎn)染效率，希望針對(duì)自己的細(xì)胞類(lèi)型做好梯度條件的摸索。每款試劑本身的配方特點(diǎn)有所差異，即使是一種細(xì)胞，用不同轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染時(shí)，這個(gè)比例還需要再做略微的調(diào)整。 

7）試劑保存：轉(zhuǎn)染試劑必須在4度保存，無(wú)論是從送貨員手中接到貨品，還是在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須在4度條件保存試劑，否則轉(zhuǎn)染效率會(huì)受到很大的影響。